采血卡的采样流程

1.收集血液

皮肤穿刺（ 图1A ） 

戴上一副一次性乳胶橡胶手套。在皮肤穿刺之前，患者应该温暖他/她的手。手指按顺序进行按摩，使血液流向穿刺部位。用合适的消毒剂（ 例如 70％异丙醇）清洁非书写手的第三或第四手指，手指的尖端远节点的手掌侧的皮肤，用 一次性安全采血针刺破皮肤。手指应保持在重力有利于指尖上的血液收集的位置。当通过皮肤穿刺收集毛细血管血液完成时，在指尖上放置绷带。

2.血斑的准备

通过皮肤穿刺收集的血液制备（ 图1B和1C ），用纱布垫擦去第一滴血，因为它可能含有多余的组织液。再次按摩手指以增加穿刺部位的血流量。将下一个血滴转移到过滤卡的一个圆圈上，不要直接用指尖接触表面。仅通过毛细作用力将血液浸入过滤器的质地中。让指尖上的下一大滴毛细血管血液在下一个圆圈中收集。继续此过程，直到所有必要的圆圈都被填满或血流停止。如果血流量不足以填充过滤卡所需的所有圆圈，请勿过度挤压或“挤”手指。 如果血流停止，则在指尖上放置绷带。 如果检查需要更多血液，则在另一根手指上进行第二次皮肤穿刺。

3.血液干燥

为了干燥血斑，将滤纸放在生物危害安全柜中的干净纸巾上，让它们在没有任何外部热源的情况下在室温下干燥，优选O / N（但至少4小时）。当干燥过程完成时，血斑具有均匀的深褐色，并且不再可见红色区域（ 图1D ）

4.干血点的储存和运输（DBS）

注意：干燥后可以中断血斑的处理。采血卡现在可以存储，储存时，将滤纸卡放入一个不透气的血样袋中，该袋包含1到2个干燥剂袋，以保护样品免受潮湿（ 图1E ）。（可选）添加湿度指示卡。将此袋尽快转移到温度为-20°C或更低的冰箱中。如果在现场条件下无法使用冷冻机，则可在-4°C或甚至在环境温度下储存长达14天。在干冰上运输冷冻DBS标本。对于最初保持在环境温度的采血卡，使用三重包装系统，其由作为内部容器的拉链袋以及内部和外部封套组成。外包装上不需要通过普通邮件装运内容标记，但必须将国际生物危害标志贴在主容器上 。如果干燥剂包和/或附加湿度指示卡变为粉红色，则排除过滤卡进一步处理。

5.干血斑的洗脱

使用一次性使用的6毫米设备从903级采血卡的每个血液浸泡的圆圈中打出一个点（ 图1F）。将所有穿孔的干血斑从单个患者转移到12孔板的一个孔中。用含有0.05％吐温20和0.08％叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水填充孔（ 图1G ）。使添加的缓冲液的体积适应用于随后分析干血斑洗脱液的测定的最小相应要求。重复这些步骤以获得第二系列干血斑洗脱液以进行分子分析。

将细胞培养板置于实验室振荡器上，让打孔干燥的血斑轻轻洗脱至少4小时，或优选O / N（ 图1H ）。

第二天，斑点几乎没有血液并且已形成溶血上清液（ 图1I ）。将这些洗脱液转移到微量离心管中。然后，使它们以10,500×g离心2分钟（ 图1J ）以从洗脱期间形成的任何碎片中释放上清液（ 图1K ）。

6.洗脱液分析

离心洗脱液现在可以用于预期的分析。使用市售试剂盒研究乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒和HIV感染标志物的洗脱液，并仔细遵循各自制造商的说明（ 图1L ）。